蜂胶在STZ所致大鼠Ⅱ型糖尿病模型中的降糖作用

 　　 刘莉

　　一.选题背景

    蜂胶（propolis）是蜜蜂从植物的芽苞、树干等部位采集的树脂，经蜜蜂加入自身的分泌物，转化而成的胶状物。被誉为自然界的“紫色黄金”。 近代的澳洲学者吉萨伯提于1979年有系统地整理蜂胶的化学成分、生物活性和医学用途的研究报告。此后，各国研究者也陆续投入蜂胶的研究[1，2]。其中对蜂胶在降糖方面的研究上也有了广泛的涉猎。

    总结蜂胶对糖尿病的防治具有以下六大作用[3-5]：调节代谢（降低血糖、防治心脑血管病）；免疫调节；抗病原微生物；增加生物酶活性、抗氧化；细胞新生；恢复体力。而蜂胶预防和治疗糖尿病的机理和途径主要有以下几方面[6-10] ：1）蜂胶蜂胶中的黄酮类、萜烯类物质具有促进利用外源性葡萄糖合成肝糖原的作用；2）蜂胶有很好的杀菌消炎作用，可以恢复胰岛细胞功能；3）蜂胶能防止脂类的氧化；4）蜂胶有加强药效的作用，可用于辅助治疗；5）蜂胶中的黄酮类物质具有很好的保护心血管的作用；6）蜂胶中的黄酮类、甙类等物质可增强ATP活性；7）蜂胶中的黄酮类物质、多糖物质具有调节机体代谢，增强机体免疫能力的作用；8）蜂胶中丰富且均衡的各种微量元素对糖尿病的防治有特殊意义；9）蜂胶可调节与糖代谢有关酶系的释放及其活性，降低餐后血糖；10）蜂胶抑制AR、GA活性、抑制蛋白糖基化，从而对抗糖尿病；11）蜂胶使受损细胞再生，利于损伤修复；12）蜂胶可通过修复和清除调节机体各种神经系统紊乱。

　　二.研究的目的与意义

  　 在以往的各项研究中有很多是以四氧嘧啶(alloxan)来复制糖尿病模型的，链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)和四氧嘧啶均可复制Ⅰ型糖尿病的动物模型,而相对于四氧嘧啶来说小剂量STZ在复制Ⅱ型糖尿病的动物模型上更具优越性[11]，因其造模稳定,快速,种属选择性不强(豚鼠只能用STZ造模) ,复制前不需禁食,组织毒性相对较小等[12]。进期的报道表明联合应用STZ和四氧嘧啶复制糖尿病大鼠模型，成功率达82.6%，且成本低[13]。故也可考虑联合应用来造模。

  　 现已有许多关于蜂胶在降糖方面的研究，但很多只是对血糖的降低这项指标比较关注，在通过实验对蜂胶在对糖尿病治疗中的其他重要项目和指标及其意义暨降糖的多种机制的阐述还不够全面。故本实验希望根据实验中对血糖、糖耐量、多种氧自由基和细胞因子的测定及对实验动物处死前后动物体液、多种器官和组织的收集和检验来从多方面多角度说明蜂胶在糖尿病治疗中的多种机制。

　　三.拟采用的技术路线

 　　1.复制动物模型

 　  方法一：小剂量多次注射STZ致Ⅱ型糖尿病模型，以40mg/kg体重的STZ左下富强注射，注射前用0.1mol/L无菌枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液（PH4.5）配制，每日上午注射1次，连续注射5次。造成胰岛β细胞轻度损伤，使多数动物产生糖耐量异常，在此基础上，给动物喂高热量饲料，10星期以后，动物可有肥胖，并伴有高血脂、高胰岛素血症及胰岛素抵抗。此模型形成率约为70％。胰岛素增敏剂显示阳性结果。

　方法二：8周龄的SD大鼠高热量喂养2个月后给予小剂量的STZ(15 mg/kg ,iv)可建立具有外周胰岛素抵抗和胰岛功能轻度受损的糖尿病动物模型,与人Ⅱ型糖尿病的发生、发展过程相似,且STZ 用量小,减少了对其他组织的损害[14]。

　　机制：STZ通过自由基损伤β细胞,使β细胞功能受损,胰岛素合成减少,引发糖尿病[15]。同一种系中STZ致细胞损伤程度取决于STZ 的量,低剂量诱导β细胞INS-1调亡,高剂量致β细胞坏死[16]。一次性大剂量注射STZ(大鼠60～80 mg/kg ,iv或ip ,小鼠100～200 mg/kg ,iv或ip ,临用前溶于011 mol/ L 柠檬酸缓冲液中)可致β细胞坏死而无胰岛炎,制成无炎性Ⅰ型糖尿病模型。注射72 h 后,血糖可稳定升高,动物有三多症状( 多饮, 多食, 多尿)。预测血糖在11.1mmo l/ L以上即可选用。小鼠多次小剂量注射(40mg/kg ,连续5d)可引发胰岛炎,制成免疫Ⅰ型糖尿病模型,STZ 可能通过细胞介导的自身免疫反应起作用[17]。作用强度与性别有关,雄性鼠更敏感[18]。

　　2.分组及治疗

  　 正常组：不造模,以蜂胶混悬液(9 ml/kg)给大鼠灌胃4周后断头处死(处死前10h禁食水,以下相同)，10只；蜂胶高、中、低剂量组(15.0ml/kg、5.0 ml/kg、0.5 ml/kg[19]):从造模结束后次日开始,以蜂胶混悬液给大鼠灌胃4周后断头处死，每组个10只；模型组：于造模结束后次日将大鼠断头处死，10只。

　　3.降糖作用

    1）空腹血糖测定：空腹尾静脉取血后用氧化酶法测血糖。观测蜂胶的降糖效果。

    2）葡萄糖耐量实验：腹腔注射糖耐量试验（intraperitoneal glucose tolerance test,IPGTT）：大鼠禁食10h后，给予葡萄糖2g/kg体重腹腔注射，在设定的时间点将尾静脉割破取血，用氧化酶法测血糖。观测蜂胶在对糖尿病的治疗过程中是否对糖耐量有影响。

　　4.处死前、后样品收集

    对实验动物处死前、后的血清、胰腺组织、肝脏、骨骼肌、脂肪、心肌进行收集。通过化验检测和病理观察检查蜂胶是否对胰腺的β细胞、肝组织、心血管系统和骨骼肌起到了保护和修复的作用，是否具有减少脂肪堆积和脂质沉积的作用。

　　5.对氧自由基的影响

    1）血清中过氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量：订购SOD、MDA试剂盒检测各组（正常、模型、治疗高/中/低剂量等5组：共50个样品）样品血清中的含量。

    2）血清一氧化氮合酶（NOS）含量：订购NOS试剂盒检测各组（正常、模型、治疗高/中/低剂量等5组：共50个样品）样品血清中的含量。 检测蜂胶是否能增强SOD、 MDA和NOS的活性，清除自由基，防止脂质氧化，保护胰岛β细胞免受自由基攻击。

　　6.对细胞因子的影响

    1）血清中白介素（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、干扰素γ（INF-γ）水平：订购IL-1β、TNF-α、INF-γ试剂盒检测各组（正常、模型、治疗高/中/低剂量等5组：共50个样品）样品血清中的含量。

    2）胰岛组织中白介素（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、干扰素γ（INF-γ）水平：订购IL-1β、TNF-α、INF-γ试剂盒检测各组（正常、模型、治疗高/中/低剂量等5组：共50个样品）样品血清中的含量。检测蜂胶是否能抑制血清中和组织中这些炎症因子的活性、生成或释放，达到抗炎、预防感染的作用。

　　四.预期结果

    1.降糖:蜂胶可显著降低STZ所致Ⅱ型糖尿病模型大鼠的血糖值，对正常大鼠的血糖也有一定的降低作用。可增加糖耐量。

    2.器官和组织检查:对胰腺的β细胞、肝组织、心血管系统和骨骼肌起到了保护和修复的作用，可有新生的细胞，同时具有减少脂肪堆积和脂质沉积的作用。预期可减少多种糖尿病引起的心血管系统等的并发症。

    3.对氧自由基的影响:蜂胶可增强SOD、 MDA和NOS的活性，清除自由基，防止脂质氧化，保护胰岛β细胞免受自由基攻击，保证血液循环的畅通。

　　4.对细胞因子的影响: 抑制血清中和组织中这些炎症因子的活性、生成或释放，预期可以达到抗炎、预防感染类并发症的作用。

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　　19.蜂胶的生物学作用和药理研究.e康图书馆.http://www.chinahealth.com.cn/lib

　　黄连素的临床应用及在治疗2型糖尿病方面的研究 

　　[摘要] 本文综合论述了黄连素在心血管系统疾病，消化道溃疡，抗菌抗病毒，抗肿瘤，循环系统，免疫系统方面疾病治疗上的应用及其作用机制。并详细介绍了黄连素在治疗2型糖尿病及其并发症方面的作用机制及特点，发展方向。 

　　[关键词] 黄连素   2型糖尿病   临床应用 

　　1．黄连素的来源，提取，生化特性

　　黄连素学名小檗碱，是生物碱的一种。它主要存在于黄柏、三棵针和黄连中。黄连分“味连”“雅连”和“云连”但总称黄连。黄连素为黄色，味极苦， 是抑制痢疾杆菌、链球菌及葡萄球菌的抗菌和消炎药。临床常作为清热解毒、抗肠道细菌感染类药物应用。近年来陆续发现其还有抗心律失常、改善充血性心力衰竭、降血糖、降血脂、抗小血板等药理作用，从而被广泛地应用于心律失常、心力衰竭、糖尿病、高脂血症等的治疗。

　　小檗碱苦寒，人心、肝、胃、大肠经，主要功效泻火、燥湿，解毒、杀虫。主要功效益肺阴，清虚火，生津止渴。

　　盐酸小檗碱

　　化学名  5,6-二氢-9,10-二甲氧苯基[g]-1,3-苯并间二氧杂环戊烯[5,6-α]喹嗪氯化二水合物

　　英文名  BERBERINE HYDROCHLORIDE  

　　分子式  C20H18ClNO4·2H2O

　　分子量  407。85 

　　2．黄连素临床应用及其机制

　　心血管系统：

　　心律失常：黄连素可以延长心肌细胞的动作电位时间和有效不应期，轻度降低0位相上升的速率，这可使单向阻滞变为双向阻滞或破坏折返环所需时程，从而消除折返性心律失常。黄连素能增加乙酰胆碱作用，乙酰胆碱可增加膜的钾电导，而使细胞内钾的外流增加，而起到抗心律失常作用[1]。

　　心力衰竭：：黄连素主要使心肌细胞动作电位时程和平台期延长，使Ca2+ 内流增加，从而起到正性肌力的作用。但由于黄连素静脉给药毒性大，甚至有人死亡，故有人提出不宜使用。另外黄连素不能取代传统的抗心力衰竭用药，对危重病例和运用黄连素效果不佳者，宜及时加用或换用强心、利尿、扩血管等治疗[1]。

　　室性早搏：黄连素抗心律失常的作用机理尚未完全明了，动物细胞电生理学实验显示，黄连素可使豚鼠心室肌动电位时程增宽(以2相为主)，有效不应期延长。黄连素分别延长心房、心室ERP和功能不应期，而对心房、心室相对不应期无影响。延长心肌APD及ERP，增加ERP／APD比值，有利于打断折返环和使之不易形成，这可能是黄连素抗心律失常的主要机制。其细胞水平的作用机制，可能与促进钙(Ca )跨膜内流有关。此外，研究还发现黄连素对血小板和血管平滑肌的a受体的抑制作用也有助于室性心律失常的控制[2]

　　高血压病：有人认为黄连素对a1，a2受体具有不同程度亲和力，从而阻滞了a受体，扩张外周血管，使血压下降；也有人认为小剂量黄连素能抗胆碱酯酶，而增加乙酰胆碱作用，扩张血管，使血压下降；另外，以药理学的方法检测黄连素片对钙离子通道的拮抗作用，发现黄连素明抑制钙离子的内流，拮抗L型钙离子通道促进剂对钙通道的激活，而起到对钙离子通道的抑制作用[1]。

　　高血小板聚集率患者：黄连素对血小板聚集具有明显的抑制作用，能改善微循环，恢复缺血区血流灌注[1]。

　　高血脂症：实验表明，黄连素能明显地增强肝脏氧化歧化酶的活性，降低肝脏过氧化脂质水平及血清甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇含量，提高机体抗氧化能力，促进脂类的分解代谢，从而起到治疗和预防动脉粥样硬化的作用[1]。

　　梗塞性疾病

　　肿瘤：有报道黄连素能抑制肿瘤细胞DNA、RNA、蛋白质和脂肪合成的作用，还抑制葡萄糖氧化成co2，且葡萄糖有对抗肿瘤细胞摄取黄连素的作用，而增强黄连素的抗肿瘤作用[1]。

　　台卫平[3，5]采用细胞培养的方法，将黄连素加入到结肠癌细胞培养环境中，观察

　　CoX：在mRNA和蛋白质水平上的改变，及检测前列腺素(PG)E：的含量以观察C0X：活性，同时观察黄连素对结肠癌细胞的生长、增殖的影响。结果显示，黄连素在浓度大于0．3pmol／I时，对HT 29细胞的COX。在mRNA和蛋白质水平均表现为抑制，亦可抑制COX：的催化活性，抑制PGE 的生成。因此推论黄连素可能通过抑制细胞内Ca2＋ 进而抑制COX：mRNA水平和蛋白质表达以及COX。对花生四烯酸的催化活性，从而抑制PGE 的生成，这可能为其抗消化道肿瘤的机制之一。

　　抗菌及消化性溃疡：复发性口疮，溃疡性结肠炎，胃炎，，小儿感染性腹泻，小儿疖肿，小儿痄腮，小儿瘁疮，小儿脓疱疮，婴儿湿疹，褥疮，慢性胆囊炎，子宫糜烂，抗病毒[1，2]。

　　糖尿病：观察血糖下降而血清胰岛素水平上升，考虑其具有抗升糖激素的作用，并可促进胰岛B细胞再生及功能恢复，小檗碱又有抑制糖异生和促进糖酵解的作用，使血糖下降。因本药同时有降压、降脂、抗感染作用，故对于预防糖尿病并发症也有意义[1]。

　　抑制醛糖还原酶活性，防治糖尿病并发症：研究发现多元醇通路的关键限速酶一一醛糖还原酶活性升高是糖尿病神经病变和糖尿病肾病等并发症发生、发展的重要原因。刘长山等观察黄连素对糖尿病患者醛糖还原酶活性抑制作用及对糖尿病神经病变多项指标的影响，结果显示黄连素治疗组治疗后醛糖还原酶活性受到抑制，运动、感觉神经传导速度的改善明显高于对照组，膀胱残余尿量亦显著少于对照组[2]。

　　对环孢素A的增效减毒作用[2]

　　免疫调节作用：黄连素对免疫系统的影响较为复杂，既有作用性质上的差异，也有剂量效应的异同，总的效应是增强单核吞噬细胞系统功能，抑制细胞和体液免疫功能[2]。

　　黄连素与骨质疏松：骨质疏松是骨密度下降所致，黄连素具有抑制破骨样多核细胞的形成及重吸收作用，阻止腰椎中骨矿物质密度的下降，进而发挥出治疗骨质疏松的功效。

　　防治老年痴呆  

　　3．黄连素治疗2型糖尿病研究

　　A单味用药：，

　　黄连素治疗糖尿病的可能机制:

　　黄连素治疗糖尿病作用肯定，对其机制的研究也在不断深入。目前的实验表明黄连素治疗糖尿病的机制可能有以下几方面[4]．

　　1.黄连素未影响胰岛素的分泌与释放，也未影响肝细胞膜胰岛素受体的数目和亲和力，其作用可能为受体后效应；它可对抗注射葡萄糖引起的血糖升高，抑制以丙氨酸为底物的糖异生，它的降血糖作用与血乳酸升高密切相关，因而可能通过抑制糖异生和0 或促进糖酵解产生降血糖作用；

　　2.黄连素能降低高胰岛素血症，增加胰岛素的生物活性，减轻糖耐量损伤，促进脂类分解代谢，提高机体抗氧化能力；

　　3.激素黄连素具有抗升糖作用，并能促进胰岛$细胞再生及功能恢复；

　　4.黄连素有与二甲双胍相似的增加胰岛素敏感性作用通过保护、修复胰岛β细胞而增加血清胰岛素的含量。

　　生地黄连水煎液可明显降低四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠的空腹血糖值，增加血清胰岛素的含量。光镜下观察模型组小鼠胰岛素内分泌细胞明显肿胀，胞浆减少，细胞排列稀疏，紊乱不均，见大小不等的空泡变性，核大小不等；而生地黄连大剂量组小鼠的胰岛内分泌细胞形态结构基本接近正常，肿胀减少，空泡变性减少，分泌细胞较模型组增加，提示其主要通过保护、修复胰岛内分泌细胞而增加血清胰岛素浓度[6]。  

　　黄连生物碱治疗糖尿病潜在的分子靶点[7]:

 　　葡萄糖代谢:一些研究表明，黄连生物碱对于影响细胞糖消耗有着类似于胰岛素的直接作用。殷峻等观察了小璧碱对HepG2细胞作用，结果提示小粟碱的降糖作用部分是通过增加肝细胞的葡萄糖消耗量来实现的，与二甲双肌类似，是不依赖于胰岛素的独立作用结果。小梁碱不但可以增加脂肪细胞的葡萄糖消耗量，还用动态的方法观测脂肪细胞对于外源葡萄糖的转运能力，发现其在小聚碱的作用下有明显提高。陈其明等观察到小巢碱对正常动物和四氧喃吮糖尿病动物都有明显降血糖作用，认为其兼有磺酞脉类和双肌类化合物特点。小聚碱还可以提高大鼠的肝糖原含量川。细胞 对 葡萄糖的消耗增加，这是一个表象，可以将其视为葡萄糖代谢增加和糖原分解释放减少净作用的结果。其中涉及到很多环节分子水平的变化，这些生物大分子都有可能成为黄连生物碱作用的靶点。归纳起来，比较重要的生物大分子有以下几个: (1 )葡萄糖运载体(GLUT)是肌肉、脂肪等胰岛素敏感组织细胞膜上的特异性从胞外向胞内转运葡萄糖的蛋白，这种蛋白在细胞膜上数量的多少，以及是否能在受到外界刺激(例如胰岛素的作用)时被充分激活从胞浆移位到细胞膜上参与葡萄搪的转运，直接影响细胞对于葡萄糖的摄取，可以说是细胞消耗葡萄糖的第一个关卡。(2)葡萄糖酵解和Krebs循环中各代谢步骤中的酶:酵解和Krebs循环是使葡萄糖最终氧化变成水和二氧化碳并产生能量物质(ATP)的重要生物化学过程。涉及的酶很多，但其中有几个限速酶影响到整个反应链的速度，例如:位于胞浆中的己糖激酶、磷酸果糖激酶、丙酮酸激酶以及线粒体中的柠檬酸合酶、异柠檬酸脱氢酶和a-酮戊二酸脱氢酶等。(3)肝糖原分解过程中的酶，如果能抑制分解酶的活性，就有助于减少肝糖向血液的输出从而降低血糖。而糖原分解的第一个步骤就是由糖原磷酸化酶催化的，因此这个酶就成为一个重要的药物作用研究靶点。(4)一些能感受细胞能量缺乏的蛋白激酶，如AMPK，此酶可以在运动时增加骨骼肌对葡萄糖的摄取，并且在能量缺乏时增加氧化产能的反应。

　　脂质代谢:一些针对小聚碱或含小粟碱中药复方的药效研究都观察到了小粟碱有助于改善糖尿病大鼠模型或病人的脂质代谢紊乱，降低血清胆固醇、甘油三醋的含量，并预测可能对于防止心血管的并发症有帮助。另外的研究闭则只观察到了小粟碱的轻微地、不明显地改善脂质代谢的现象。但还有几则临床应用小粟碱给予糖尿病人降脂治疗的短篇报道则给出了较为肯定的结论。

　　脂质代谢紊乱对机体影响很大，甚至是造成糖尿病人胰岛素抵抗的直接原因。现在已经明确发现，循环系统中游离脂肪酸(FFA)浓度增加就足以导致肝组织的胰岛素抵抗，肌肉组织中甘油三酷的堆积也可以导致该组织的胰岛素抵抗，如果胰岛日细胞中甘油三醋过多则会损害其分泌胰岛素的功能[15]在影 响 脂 质代谢的大分子中，比较重要的有:合成代谢转录因子SREBP-1，此因子可以使产生脂肪合成酶系的相关基因表达增加;受AMP激活的蛋白激酶(AMPK )，这种酶在细胞内部能量缺乏时被激活，使下游的酶磷酸化，从而增加脂肪氧化减少脂肪合成，而且还能对SREBP-1起到抑制作用;乙酞COA梭化酶(ACC)，它就是一个AMPK的底物，被磷酸化后失活，从而使脂肪合成停止。

　　炎症因子:一些炎症因子对于胰岛素抵抗的发生起着重要的作用，从起初的肿瘤坏死因子(TNF-a )和白介素一6(IL-6)，到后来的脂联素、抵抗素等。在肥胖者的脂肪组织细胞中TNF-a的表达水平明显增高且与胰岛素水平呈正相关，如果体重下降，其表达水平亦随之减少;TNF-a能调控很多脂肪细胞分泌的细胞因子，从而作用于脂肪的摄取和代谢。TNF-a的净效应是增加脂解，减少脂肪的合成，增加了FFA向循环系统的释放，同时它还能抑制GLUT蛋白的基因表达，下调细胞内GLUT的含量，以及削弱胰岛素信号传导通路。总之，TNF-a是引起胰岛素抵抗的重要因素。同样 ，在 肥胖者的脂肪组织中IL-6的含量也增加，其增加肝细胞甘油三醋的输出，减少脂蛋白脂肪酶(LPI)的含量，增加FFA的输出，导致胰岛素抵抗C 反 应 蛋白(CRP)是由肝细胞合成的一种非特异性的炎症因子，是急性时相反应的标志物。而急性时相反应与五型糖尿病及其大血管、微血管并发症有着直接的关系。很多证据表明，CRP已经成为I型糖尿病发病的重要预测因子。由于脂肪细胞分泌的TNF-a和IL-6是刺激肝脏合成CRP的主要因素，因此检测血清CRP水平可以成为衡量TNF-a和IL-6浓度高低的一个间接的方法。

　　目前 尚 未 见 到直接研究黄连生物碱作用于炎症因子报道。但有人在研究黄连及小聚碱抗炎症机制的时候探讨过其对IL-1和TNF的影响。郝任等发现小聚碱能抑制IL-1和TNF激活的内皮细胞与多形核白细胞(PMN)的勃附，拮抗这2种细胞因子的作用，并能下调由IL-1和TNF诱导的HUVEC表面ICAM-1分子的高表达，同时可以减少TNF诱导的PMN CD18表达增多。王利津等也发现黄连解毒汤(黄连、黄荃、黄柏、桅子)对IL-1的生成有抑制作用。

　　抗氧化、清除自由基:细胞代谢中时刻存在着氧化反应，产生大量的自由基，适当浓度的自由基对于激发细胞功能，抵抗细菌、病毒的攻击，有着重要的意义。但一旦细胞中的某些清除自由基的功能发生了障碍，过多聚集的自由基就会攻击细胞内蛋白、膜脂、核酸等重要生命活动所需的分子，造成细胞功能的障碍，严重时可以引起细胞的凋亡。I型糖尿病后期出现的胰岛素分泌绝对不足，向I型糖尿病转变的过程，很大程度上要归因于胰岛R细胞的凋亡。现 在 有 证据表明，增高的FFA对于月细胞会产生毒性，而一些细胞因子如IL-1,T NF-a,IF N-Y也促使月细胞的凋亡。共同的作用机制诱导了一氧化氮合酶(NOS)的产生，从而合成了大量的自由基分子NO，而NO会损害日细胞的DNA，并通过还尚不明确的机制，使细胞凋亡。此外，I型糖尿病人胰岛R细胞持续地分泌胰岛素需要线粒体旺盛的氧化磷酸化过程产生ATP，同时也产生了大量的活性氧自由基[24]。这些自由基如果得不到清除，则会逐渐损伤线粒体，同时还可以进一步诱导归细胞的凋亡。很多 研 究都发现了小聚碱有抗氧化、清除自由基的功能。黄连解毒汤对红细胞的自氧化和H2O:所致的氧化均有显著的抑制作用，并有一定的清除经基自由基的活性。金昔陆等发现小粟碱结构类似物能抑制脂质过氧化和清除经基自由基。Naoko等认为小粟碱对于地塞米松诱导的鼠胸腺细胞的凋亡有抑制作用。席刚明等发现小聚碱可以增加小鼠全脑缺血后海马CA:区bcl-2基因的表达，降低Bax基因的表达，从而减少凋亡的发生。小聚碱可以减少脂质过氧化物生成，提高谷胧甘肤(GSH)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。何浩等[5]观察到了小璧胺能参与清除活性氧自由基并保护SOD,CAT及GSH-Px等清除自由基的酶类，使它们的活性维持更长的时间。孙翠梅等在研究同属黄连生物碱的巴马汀的药理作用时发现它可以降低脑缺血组织中NO的含量，从而保护缺血组织。

　　细胞K+离子通道和细胞内Ca2+ 浓度:胰岛p细胞分泌胰岛素的机制与其细胞膜上的K十通道和细胞内Ca'+浓度的变化有着密切的关系。当R细胞外葡萄糖浓度升高时，就通过p细胞膜上葡萄糖运载体2(GLUT2)向细胞内转运并通过糖酵解和Krebs循环过程产生ATP。升高的ATP浓度则特异性地关闭ATP依赖型的K+通道，从而引起日细胞膜的去极化，继而引起细胞外Ca'+的流人和细胞内源性Ca2+ 的释放。细胞内Ca'+浓度的上升就可以使含有胰岛素的分泌囊泡从内质网向细胞膜转移并将胰岛素释放到胞外。磺酞脉类降糖药物就是通过作用于胰岛R细胞膜K+通道上的磺酞脉受体(SUR1)，引起K+通道的关闭而起到促进胰岛素分泌的药理作用的。目前，一些研究表明小聚碱能够阻断心肌细胞对ATP敏感的K+通道，其结构类似物也是一种肝细胞K+通道的阻断剂。但是有报道表明小粟碱未能增加正常小鼠的胰岛素分泌，也不增加给葡萄糖负荷后的胰岛素释放。所以，小聚碱是否同样能作用于p细胞的与胰岛素分泌密切相关的K十通道，效果是否也是其阻滞剂，仍是一个未知的课题。此外，有研究观察到小粟碱有减少平滑肌细胞内Ca2+浓度的作用，假设他们也作用于胰岛p细胞，降低胞浆中的Ca'+浓度的话，则会对胰岛素的分泌产生抑制作用。澄清这些问题有助于更好地阐明胰岛细胞是否是黄连生物碱作用的靶点之一。

　　胰岛素对糖尿病并发症及合并症的治疗：

　　糖尿病肾病

　　刘长山[8]等利用糖尿病SD 大鼠动物模型观察了中药黄芩甙、黄连素及典型的醛糖还原酶抑制剂sorbinil 对大鼠组织醛糖还原酶（AR）的活性和肾脏病变的影响，结果发现糖尿病鼠经上述3种药物治疗后，其晶体、肾脏AR活性明显下降，尿蛋白呈明显下降趋势，肾小球病理变化得到明显改善，提示中药黄芩甙、黄连素对逆转糖尿病肾脏病变疗效显著，有望为糖尿病肾脏病变的防治提供一条新途径。

　　糖尿病神经病变

　　刘长山[11]等的研究表明黄连素对醛糖还原酶的抑制作用较强，可明显改善糖尿病鼠的坐骨神经传导速度，且与sorbinil相当18。在糖尿病神经病变防治方面，黄连素不失为一有效药物。

　　糖尿病性腹泻

　　袁健等报道黄连素能明显延长小肠传递时间，延长滞留时间有利于物质吸收，故对糖尿病自主神经病变所致的腹泻有很好的疗效。

　　糖尿病合并心脑血管疾病

　　张继英[12]等研究证实，大剂量黄连素能明显改善糖尿病病人的血液流变学，在降低血浆黏度、红细胞聚集指数、红细胞压积、纤维蛋白原及血糖等方面优于川芎嗪。黄伟民[13]等还观察了黄连素对ADP 及肾上腺素诱导正常人及血小板聚集率增高病人血小板聚集的体外影响，证明均有抑制作用，与应用潘生丁合并阿司匹林有几乎相同疗效。体外实验还证明黄连素能显著抑制富含血小板血浆凝块收缩的作用。糖尿病病人常见血小板的黏着和聚集性增高，导致凝血异常，从而导致心脑血管血栓事件的发生，黄连素的上述作用对预防和治疗糖尿病合并心脑血管疾病具有重要价值。

　　糖尿病合并高脂血症

　　已有实验[17]证明小檗碱能够降低喂高胆固醇乳剂小鼠的血清胆固醇水平，并纠正NIDDM大鼠脂肪代谢紊乱。孙杰[14]选择一组老年高脂血症病人进行临床观察，在低脂饮食1月以上加黄连素片.0.3~0.4g,每日3次口服，不使用其他降脂药，结果发现降胆固醇、三酰甘油的总有效率均为100%。糖尿病合并高脂血症已众所周知，且降脂药均有一定的副作用，黄连素副作用少，耐受性好，是一种安全有效的降脂药物。

　　B联合用药：

　　优降糖联合黄连素：

　　黄连素+优降糖1.25mg与单一降糖药优降糖治疗糖尿病比较，疗效明显优于单一降糖药，且血糖下降的时间、水平、稳定性均比单一降糖药具有明显优越性。

　　卡托普利联合维生素E黄连素：

　　卡托普利属于血管紧张素转换酶抑制剂(ACED，研究证明ACEI能明显降低肾组织局部Ang I水平，降低肾小球毛细血管内压、减少尿蛋白的排泄，抑制TGF日的产生，减轻ECM的积聚而改善肾脏功能。现代中药研究黄连素体内外均可抑制AR活性，使糖代谢多元醇通路受到抑制，间接阻断了TCF日，减轻了对肾脏的损害。此外维生素E有明显的抗氧化作用，抑制了微血管内皮细胞二酞基甘油(DAG)的合成，阻断了二酞基甘油一蛋白激酶C (DAG-PKC)的异常通路，减少了细胞和微血管的损害。另一方面维生素E抑制氧自由基的产生，亦可防止血管内皮细胞的损伤。因此本组选用上述三药联用治疗DN起到了较为理想的效果[15，16]。

　　中药——蜂胶，玉泉丸，六味地黄丸等

　　降糖散(黄连素0.5g，人参0.5g,构祀子5g，黄精4g，黄茂5创)

　　四参三黄二虫饮(红参、沙参各12g，丹参、生地黄芡各12g，元参12g,黄精20g,蚂蚁粉、僵蚕粉各4g，黄连素0.5g)

　　4.展望：

　　药效，机制，药量，副作用，不良反应，联合用药

　　黄连素作为抗生素已有较长的应用历史，临床无明显副作用。黄连素作为降糖药亦有十余年的应用史，除极少数患者有长期应用而见便秘症状外，菌群失调、急性心源性脑缺氧综合征;过敏性休克;麻疹样药疹和尊麻疹样药疹;血色素白细胞减少;肠道刺激;头晕耳鸣等症发生率极低。且黄连素有降脂、醛糖还原酶抑制剂等作用，对糖尿病及糖尿病并发症如高血压、冠心病、动脉硬化、高脂血症、周围神经病变应能起到一药多用的作用，对糖尿病合并有胃肠疾病如慢性胃炎、溃疡病、结肠炎等的治疗，有较好的辅助治疗作用，且黄连素价格低廉，易于推广。亦有当黄连素达到降糖剂量后，在加大剂量亦不引起低血糖的报道，因此在临床应用中较安全临床应 用 黄连素以及其他降糖药一样，有一定的适应症，对糖尿病兼见舌红、口干、口渴、皮肤疖肿、膀胧炎、神经炎等炎性病变者，效果会更好。

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